2022年末，USP<621>Chromatography指南的修訂版生效，日本隨之公布了第十八版日本藥典第一次增補(bǔ)本。其內(nèi)容是將規(guī)定了市售醫(yī)藥品通過(guò)色譜法等方法進(jìn)行檢測(cè)的USP專(zhuān)論，更新為通過(guò)超高速、高性能色譜法（UHPLC）進(jìn)行試驗(yàn)。在將專(zhuān)論試驗(yàn)法轉(zhuǎn)換為UHPLC時(shí)，不需要進(jìn)行重新驗(yàn)證，可在保持以往實(shí)驗(yàn)方法的分離性能的同時(shí)，實(shí)現(xiàn)縮短時(shí)間、節(jié)省溶劑的成本優(yōu)勢(shì)。另外，其內(nèi)容不僅適用于等度分離，還適用于梯度分離。我們將詳細(xì)說(shuō)明在進(jìn)行尺寸排阻色譜分析時(shí)，根據(jù)新版USP規(guī)定，L59類(lèi)型色譜柱以及轉(zhuǎn)換為UHPLC-SEC方法時(shí)的條件設(shè)定。

一、SEC分析方法的轉(zhuǎn)換

      USP對(duì)影響分離的因素，如色譜柱內(nèi)徑(dc)、長(zhǎng)度(L)、填料內(nèi)徑(dp)、流速(Fc)等參數(shù)做出了更改，不僅以短柱確保了不低于原有檢測(cè)法的分離性能，還實(shí)現(xiàn)了縮短時(shí)間、節(jié)省溶劑的優(yōu)勢(shì)。將與USP（L59）對(duì)應(yīng)的色譜柱TSKgel G3000SWXL（5μm，HPLC）色譜柱轉(zhuǎn)換為T(mén)SKgel UP-SW3000-LS（2 μm，UHPLC）時(shí)，流速變化允許范圍如下表所示。作為參考，如果是串聯(lián)2支TSKgel G3000SWXL色譜柱、以高分離度為目的的色譜柱體系的質(zhì)量管理/分析法的情況下，使用30cm的TSKgel UP-SW3000-LS色譜柱，也可得到相同的分離效果。

*  使用2支30cm（串聯(lián)2支色譜柱）時(shí)，與UHPLC 30cm色譜柱相同

** 應(yīng)在不超過(guò)色譜柱最大壓降的流速下使用

二、從HPLC-SEC（30cm色譜柱）轉(zhuǎn)換為UHPLC-SEC（15cm色譜柱）

     分析單克隆抗體時(shí)，從30 cm 的TSKgel G3000SWXL色譜柱轉(zhuǎn)換為15 cm 的TSKge UP-SW3000色譜柱的分析示例如下圖所示。在符合USP規(guī)定的分析條件下進(jìn)行UHPLC分離，在確保分離度為同等以上的同時(shí)，分析時(shí)間減少了約50%，流動(dòng)相也減少了約80%。

三、從HPLC-SEC（30cm色譜柱×2支）轉(zhuǎn)換為UHPLC-SEC（30cm色譜柱）的分析實(shí)例

     在進(jìn)行質(zhì)控分析時(shí)，為了提高分離度有時(shí)會(huì)串聯(lián)2支30 cm的TSKgel G3000SWXL色譜柱進(jìn)行分析。在這種情況下，可轉(zhuǎn)換為使用30 cm的TSKgel UP-SW3000色譜柱進(jìn)行UHPLC分析。

四、梯度分離時(shí)從HPLC轉(zhuǎn)換為UHPLC

      修訂后的USP給出了使用梯度分離的其他色譜分析模式從HPLC轉(zhuǎn)換為UHPLC的規(guī)定。進(jìn)行梯度分離時(shí)，需要追加設(shè)定梯度體積、梯度坡度等項(xiàng)目。關(guān)于復(fù)雜的條件設(shè)定，由于主要設(shè)備制造商的UHPLC系統(tǒng)支持符合USP規(guī)定的軟件，所以可使用該類(lèi)軟件設(shè)定實(shí)驗(yàn)方法的條件。

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